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Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂 KGA108

发布时间:2020-03-20

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Annexin V-FITC/PI  细胞凋亡检测试剂 KGA108

Annexin V-FITC/PI  细胞凋亡检测试剂
Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit


Cat numberKGA105-KGA108
Store at 2-8℃ for 12 monthsprotected from light
For Research Use Only(科研专用)
一、 试剂盒说明
在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂
酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为 35~36kD Ca 2+ 依赖性磷脂结合蛋白,与磷
脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此 Annexin V
被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将 Annexin V 进行荧光素 FITC 标记,以标记了的 Annexin V 作为荧
光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死
细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将 Annexin V PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细
胞区分开来。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。
二、 试剂盒组份
组份
Cat: KGA105
(10 assays)
Cat: KGA106
(20 assays)
Cat: KGA107
(50 assays)
Cat: KGA108
(100 assays)
储存条件
AnnexinV-FITC 50 μL 100 μL 250μL 500 μL 2-8℃,避光
Propidium Iodide 50 μL 100 μL 250μL 500 μL 2-8℃,避光
Binding Buffer 5.0 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 2-8℃
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器
1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片(荧光显微镜观察需用)、PBS、不含 EDTA 的胰酶消化液
四、使用注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-FITCPropidium Iodide PI)避光保存及使用。
3. Propidium IodidePI)有毒,操作时要戴手套。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于 1×10 5 ,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,需用不含 EDTA的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而
用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含 2%BSA PBS 中,防止
进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每
次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
五、  操作方法
1. 悬浮细胞离心(2000rpm 离心 5min)收集;贴壁细胞用不含 EDTA的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不
易过长,否则容易引起假阳性);
2. PBS 洗涤细胞二次(2000rpm 离心 5min)收集 1~5×105 细胞;
3. 加入 500μL Binding Buffer 悬浮细胞;
4. 加入 5μLAnnexin V-FITC 混匀后,加入 5 μL Propidium Iodide,混匀;
5. 室温、避光、反应 515min
6. 请在 1 hour 内,进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A .荧光显微镜观察
1) 滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞;
2) 对于贴壁细胞来说,也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡;
1 将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组;
2 PBS 洗涤细胞两次;
3 500μL Binding Buffer 中加入 5μLAnnexin V-FITC5 μL Propidium Iodide,混匀;
4 将上述溶液滴加于盖玻片表面,使盖玻片表面均匀覆盖;
5 避光、室温反应 5 min
6 将盖玻片倒置于载玻片上,于荧光显微镜下、双色滤光片(FITC 和罗丹明)观察。Annexin V-FITC
光信号呈绿色,PI 荧光信号呈红色。
B .流式细胞仪分析
1) 用流式细胞仪检测,激发波长 Ex=488 nm; 发射波长 Em=530 nm
2) Annexin V-FITC 的绿色荧光通过 FITC 通道(FL1)检测;PI 红色荧光(流式 Ex=488nm,Em≥630nm)通
FL2 FL3 通道检测,建议使用 FL3
3) 荧光补偿调节:使用经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。

Annexin V-FITC/PI  细胞凋亡检测试剂现货供应中!!上海臻诺生物科技有限公司

 

技术参数

产品组份: AnnexinV-FITCPropidium IodideBinding Buffer

应用实验类型: 细胞凋亡检测

检测方法: 流式分析,荧光成像

特殊物理化学性质说明: FITCEx/Em=495nm/519nmPIEx/Em=535nm/617nm(结合dsDNA

试剂盒保存温度: 2-8for 12个月,避光

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